Μολυσματικές ασθένειες και οι αιτιολογικοί παράγοντες τους

By | 2020-02-21

Οι μολυσματικές ασθένειες προκαλούνται από ορισμένους μικροοργανισμούς – παθογόνα, μεταδίδονται από τον μολυσμένο οργανισμό σε έναν υγιή οργανισμό και μπορούν να προκαλέσουν επιδημία ή πανδημία. Μεταξύ των αιτιολογικών παραγόντων των μολυσματικών ασθενειών μπορεί να εντοπιστεί:

Βακτήρια – Αυτοί είναι μονοκύτταροι μικροοργανισμοί με τη μορφή ραβδίων (παράγοντες που προκαλούν τυφοειδή πυρετό, παρατυφοειδές Α και Β), σφαίρα (σταφυλόκοκκος, στρεπτόκοκκος), σπειροειδείς σπείρες ή καμπύλες ραβδώσεις (cholera vibrio). Η μορφή σχήματος ράβδου αντιπροσωπεύεται από τη μεγαλύτερη και πιο ποικίλη ομάδα βακτηρίων.

Ιοί – Αυτοί είναι οι μικρότεροι μικροοργανισμοί, τα μεγέθη των οποίων μετρούνται σε νανόμετρα. Αυτά περιλαμβάνουν τους παθογόνους παράγοντες της γρίπης, του αφθώδους πυρετού, της πολιομυελίτιδας, της ευλογιάς, της εγκεφαλίτιδας, της ιλαράς και άλλων ασθενειών.

Μπορείτε να δείτε τους ιούς μόνο σε πολύ μεγάλη μεγέθυνση (30.000 φορές) χρησιμοποιώντας ένα ηλεκτρονικό μικροσκόπιο. Η δομή των ιών είναι πολύ περίπλοκη, έχουν μεγάλη ποικιλία ιδιοτήτων. Οι ιοί είναι αυστηρά ενδοκυτταρικά παράσιτα που μπορούν να αναπτυχθούν μόνο μέσα στα κύτταρα του ξενιστή τους. Το κύριο συστατικό των ιών – το νουκλεϊνικό οξύ – είναι μια ένωση που χρησιμεύει ως υλική βάση της κληρονομικότητας και πολλά άλλα φαινόμενα της ζωής. Οι ιοί προκαλούν μεγάλο αριθμό ανθρώπινων ασθενειών.

Ρικέτσια – παράγοντες που προκαλούν τύφο, Q πυρετό, κλπ. – καταλαμβάνουν μια ενδιάμεση θέση μεταξύ των βακτηριδίων και των ιών. Τα ρικέτσια έχουν τη μορφή ραβδιών ή κοκκίων. Είναι σημαντικά μικρότερες από πολλά βακτήρια. Σε αντίθεση με τα βακτηρίδια, δεν αναπτύσσονται σε τεχνητά θρεπτικά μέσα. Οι ασθένειες που προκαλούνται από διάφορους τύπους παθογόνων ουσιών αυτής της ομάδας καλούνται ρικετσιώσεις.

Σπυροχέτες (αιτιώδεις παράγοντες τυφοειδούς, σύφιλης) είναι υπό τη μορφή λεπτών, ανοιχτών ακτίνων, ενεργά κάμψεων βακτηριδίων.

Μύκητας , ή μικροσκοπικοί μύκητες, σε αντίθεση με τα βακτηρίδια, έχουν μια πιο σύνθετη δομή. Οι περισσότεροι από αυτούς είναι πολυκύτταροι οργανισμοί. Κλωστοποιημένα μικροσκοπικά μυκητιακά κύτταρα. Τα μεγέθη κυμαίνονται από 0,5 έως 10-50 μικρά ή περισσότερο.

Οι περισσότεροι μύκητες είναι σαπροφύτες, μόνο μερικοί από αυτούς προκαλούν ασθένειες σε ανθρώπους και ζώα. Τις περισσότερες φορές, προκαλούν διάφορες αλλοιώσεις του δέρματος, των μαλλιών, των νυχιών, αλλά υπάρχουν είδη που επηρεάζουν τα εσωτερικά όργανα. Οι ασθένειες που προκαλούνται από μικροσκοπικούς μύκητες ονομάζονται μυκητιάσεις..

Ανάλογα με τη δομή και τα χαρακτηριστικά, τα μανιτάρια χωρίζονται σε διάφορες ομάδες.

1. Οι παθογόνοι μύκητες περιλαμβάνουν:

• ένας μύκητας που μοιάζει με ζύμη που προκαλεί σοβαρή ασθένεια – βλαστομυκητίαση.

• ακτινοβόλο μανιτάρι που προκαλεί ακτινομύκωση.

• παθογόνα βαθιές μυκητιάσεις (ιστοπλάσμωση, κοκκιδοειδής).

2. Από την ομάδα των αποκαλούμενων «ατελειών μανιταριών», παθογόνα πολλών δερματομυκητών είναι ευρέως διαδεδομένες.

3. Για τους μη παθογόνους μύκητες, η μούχλα και η μαγιά είναι πιο συνηθισμένες..

Πρωτόζωα – μονοκύτταροι μικροοργανισμοί που μπορούν να βλάψουν την ανθρώπινη υγεία, ιδίως όταν μειώνουν τις προστατευτικές λειτουργίες του σώματός του. Τα πρωτόζωα έχουν μια πιο σύνθετη δομή από τα βακτήρια. Οι παράγοντες που προκαλούν τις λοιμώδεις νόσους των ανθρώπων μεταξύ των απλούστερων είναι η δυσεντερική αμοιβάδα, το ελονοσιακό πλασμόδιο και άλλοι. Σε αντίθεση με άλλα παθογόνα, μερικοί εκπρόσωποι αυτής της ομάδας, για παράδειγμα οι ελμινθικοί (παρασιτικοί σκώληκες), τα αρθρόποδα.

Επομένως, η αιτία της εμφάνισης μολυσματικής νόσου είναι η διείσδυση ενός παθογόνου παράγοντα σε έναν ευαίσθητο οργανισμό σε επαρκή ποσότητα και από μία ειδική διαδρομή παθογόνου. Οι περισσότερες μολυσματικές ασθένειες έχουν περίοδο επώασης – το χρονικό διάστημα μεταξύ της μόλυνσης και την εμφάνιση των πρώτων συμπτωμάτων.

Ταξινόμηση των μέσων καλλιέργειας και μέθοδοι για την παρασκευή τους.

Τα μέσα καλλιέργειας ταξινομούνται ανάλογα με τα συστατικά της πηγής, τη συνοχή, τον σκοπό, τη χημική σύνθεση.

Ανάλογα με τη χημική σύνθεση και τα αρχικά συστατικά, διακρίνονται οι ακόλουθοι τύποι μέσων καλλιέργειας.

Αβέβαιες χημικές ενώσεις. Διακρίνονται σε: 1) περιβάλλον ζωικής προέλευσης (αρχικά προϊόντα – κρέας, ψάρι, αυγά, γάλα κ.λπ.) · 2) περιβάλλον φυτικής προέλευσης (αρχικά προϊόντα – σόγια, μπιζέλια, πατάτες, καρότα κ.λπ.).

Ορισμένα προϊόντα χρησιμοποιούνται στη φυσική τους μορφή (πατάτες, καρότα, γάλα κ.λπ.), αλλά συχνότερα οι ζωικοί και φυτικοί ιστοί υποβάλλονται σε διάφορες επεξεργασίες (εκχύλιση, ενζυματική ή όξινη υδρόλυση).

Διάσημες χημικές ενώσεις (συνθετικό). Περιλαμβάνουν πολύ γνωστές χημικές ενώσεις (άλατα, υδατάνθρακες, αμινοξέα, βιταμίνες, κ.λπ.) σε μια βέλτιστη ποσοτική αναλογία. Τα συνθετικά θρεπτικά μέσα χρησιμοποιούνται όταν η αυξημένη κυτταρική μάζα πρέπει να ελευθερωθεί στο μέγιστο από τις οργανικές ενώσεις έρματος που συνθέτουν συμβατικά μέσα, για παράδειγμα, όταν λαμβάνουν διαγνωστικά αλλεργιογόνα ή όταν μελετούν τις μεταβολικές ανάγκες ενός μικροοργανισμού σε μια συγκεκριμένη χημική ένωση.

Η σύσταση του θρεπτικού μέσου διαφοροποιείται σε πυκνή, ημι-υγρή και υγρή.

Υγρά μέσα καλλιέργειας.Παρασκευάζεται με εκχυλίσματα, υδρολύματα, διαλύματα αρχικών προϊόντων.

Ημι-ρευστά και στερεά μέσα. Η απαραίτητη συνοχή δίνεται στο μέσο με την προσθήκη διαφόρων παρεμβυσμάτων.

Το άγαρ-άγαρ (Malay jelly) είναι ένας πολυσακχαρίτης, ένα προϊόν της επεξεργασίας ορισμένων φυκών. Λιώνει στους 80. 86 ° C, σκληρύνει στους 40 ° C. Για τη λήψη πυκνών μέσων προστίθεται σε ποσότητα 1,5. 2%, λιγότερο συχνά 3%. ημι-υγρό – 0,3. 0,7%.

Η ζελατίνη είναι ένα εκχύλισμα από ιστούς που περιέχουν πολλά κολλαγόνο (οστά, χόνδρο, τένοντες, κλπ.). Η γέλη ζελατίνης τήκεται στους 25 ° C, πράγμα που καθιστά ακατάλληλο για την ανάπτυξη μικροοργανισμών με βέλτιστη θερμοκρασία 37,38 ° C. Επιπλέον, ένας αριθμός βακτηρίων εκκρίνει πρωτεολυτικά ένζυμα που αποσυνθέτουν ζελατίνη. Συνήθως προστίθεται 10% ζελατίνης σε μέσα καλλιέργειας..

Σύμφωνα με το σκοπό τους, διακρίνουν τα κοινά (βασικά), εμπλουτισμένα, ειδικά, εκλεκτικά (επιλεκτικά) και διαφορικά διαγνωστικά θρεπτικά μέσα.

Κοινά (κύρια) περιβάλλοντα. Χρησιμοποιούνται για την καλλιέργεια σχετικά ανεπιτήδευτων μικροοργανισμών..

Πιο συχνά, το νερό κρέατος, το χωνευτήριο Hottinger και τα υδρολύματα φυτών χρησιμοποιούνται ως αρχικά συστατικά για την παρασκευή βασικών μέσων..

Κρέας από το κρέας: το βόειο κρέας απελευθερώνεται από τα οστά, το λίπος, τους τένοντες, περνάει μέσα από ένα μύλο κρέατος. Το κιμά χύνεται με νερό της βρύσης σε αναλογία 1: 2, βρασμένο για 1 ώρα.Μετά το βράσιμο, το νερό κρέατος ψύχεται, διηθείται μέσα από ένα φίλτρο γάζας βάμβακος, στη συνέχεια προστίθεται με νερό της βρύσης στον αρχικό του όγκο, χύνεται σε δοχεία κλεισμένα με βύσματα γάζας βάμβακα αποστειρώθηκε στους 120 ° C για 20 λεπτά.

Ο μαγειρέματος Hottinger παρασκευάζεται από απόβλητα κρέατος με τρυπτική υδρόλυση. Το λίπος, η περιτονία, οι τένοντες ψιλοκομίζονται, γεμίζονται με ζέον νερό σε αναλογία 1: 2, βράζονται, ψύχονται στους 45 ° C και προστίθεται παγκρεατίνη, γίνεται αλκαλικό με διάλυμα ανθρακικού νατρίου σε ρΗ 7,8. 8,0, ανακινήστε και προσθέστε χλωροφόρμιο (10 ml / l), κλείστε καλά, διατηρήστε σε ζεστό χώρο για 10 ημέρες, πάρτε το προϊόν υδρόλυσης (πέψη).

Ο ζωμός με πεπτόνη από κρέας (BCH). Σε 1 λίτρο νερού με βάση το κρέας προσθέστε 1% πεπτόνη [1] και 0,5% χλωριούχο νάτριο-

Το Σχ. 32. Προετοιμασία του άγαρ κοπριάς

Το απαιτούμενο ρΗ λαμβάνεται με κλασματική προσθήκη ενός 10% διαλύματος υδροξειδίου του νατρίου ή υδροξειδίου του καλίου. Διηθήστε μέσω ενός φίλτρου χαρτιού, ρίξτε σε φιαλίδια, σωλήνες και αποστειρώστε στους 120 ° C "C.15.20 λεπτά.

Άγαρ με πεπτόνη από κρέας (MPA): 2. 3% πλυμένο άγαρ με λεπτόκοκκο άγαρ που προστίθεται στο MPB, θερμαίνεται έως ότου το άγαρ τήκεται, έρχεται σε βρασμό, το ρΗ είναι θερμό, κατόπιν, αν είναι απαραίτητο, φέρεται στην επιθυμητή τιμή (7, 2.7.6), διηθήθηκε μέσω φίλτρου βαμβακιού. Το διηθημένο θερμό άγαρ χύνεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες και φιάλες, αποστειρώνεται με αυτόκλειστο σε 1 atm 20. 30 λεπτά. Για να ληφθεί μια λοξότμητη επιφάνεια άγαρ που είναι κατάλληλη για σπορά, μετά από αποστείρωση, οι σωλήνες με τετηγμένο ΜΡΑ αφήνονται σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι να σφραγιστούν σε κεκλιμένη θέση (το άκρο με το πώμα ανυψώνεται) (Εικ. 32).

Χρησιμοποιείται ευρέως η καλλιέργεια μικροοργανισμών σε στερεά θρεπτικά μέσα σε τρυβλία Petri. Η διάμετρος ενός τυπικού τρυβλίου Petri (σχήμα 33) είναι περίπου 10 cm, παράγονται κύπελλα μικρότερων και μεγαλύτερων διαμέτρων, καθώς και πλαστικά κύπελλα μίας χρήσης. Στο

τα πρότυπα αποστειρωμένα τρυβλία Petri πάνω από τη φλόγα του καυστήρα χύνονται περίπου 20 ml λειωμένου και ψύχονται στους 45 ° C "Από θρεπτικό άγαρ, οι πλάκες τοποθετούνται σε οριζόντια επιφάνεια μέχρις ότου στερεοποιηθεί το άγαρ..

Το ημι-υγρό άγαρ κρέατος-πεπτόνης (PGA) παρασκευάζεται ως ΜΡΑ, αλλά προστίθεται άγαρ 0,25%. Βράζουμε με ανάδευση μέχρις ότου το άγαρ τήκεται εντελώς, ρυθμίζουμε το ρΗ στο 7,2. 7.6, διηθήθηκε ενώ ήταν θερμό, σε αυτόκλειστο.

Ζελατίνη κρέατος-πεπτόνης (ΜΡΑ): 10 προστίθεται στο BCH. Το 20% της θρυμματισμένης ζελατίνης θερμαίνεται μέχρι να λιώσει το σφραγιστικό, το ρΗ ρυθμίζεται στο 7.2. 7.4, βράστηκε, διηθήθηκε μέσω φίλτρου από βαμβάκι, χύθηκε σε σωλήνες και αποστειρώθηκε κλασματικά σε συσκευή Koch για τρεις ημέρες για 20 λεπτά ή μία φορά σε αυτόκαυστο στους 112 ° C για 15 λεπτά.

Θρεπτικό υπόστρωμα Hottinger: το κύριο συμπλήρωμα του Hottinger αραιώνεται με νερό της βρύσης σε αναλογία 1: 5 (1: 8) σε περιεκτικότητα σε άζωτο αμίνης 120 mg%, χλωριούχο νάτριο 0,5%, 0,1 g όξινου φωσφορικού καλίου, το ρΗ ρυθμίζεται στο 7,4. 7.6, βραστό 15. 20 λεπτά, διηθήθηκε μέσω ενός βαμβακερού γάζας ή χαρτιού, χύθηκε σε δοχεία και αποστειρώθηκε στους 120 ° C 20. 30 λεπτά.

Το άγαρ Hottinger παρασκευάζεται με προσθήκη 2% άγαρ άγαρ στο ζωμό Hottinger.

Οι επιχειρήσεις βιολογικής βιομηχανίας παράγουν έτοιμο θρεπτικό ζωμό και άγαρ με τη μορφή ξηρής σκόνης.

Ο θρεπτικός ζωμός περιέχει (g / l): υδρολύτη τρυπτικής σαρδελόρεγγας – 10,05, χλωριούχο νάτριο – 4,95. Δείγμα σκόνης βάρους 15 g διαλύεται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού, βράζεται για 2 λεπτά, διηθείται μέσω χάρτινου ηθμού, χύνεται σε δοχεία και αποστειρώνεται σε αυτόκλειστο στους 120 ° C για 20 λεπτά (ρΗ 7,3).

Το άγαρ θρεπτικών συστατικών περιέχει (g / l): ενζυματικό προϊόν υδρόλυσης της ζύμης ζωοτροφής – 12,0; άγαρ – 12,5; χλωριούχο νάτριο – 5.5. Ένα δείγμα σκόνης βάρους 36 g διαλύεται σε 1 λίτρο απεσταγμένου νερού, βράζεται για 3 λεπτά, διηθείται μέσω βαμβακερού φίλτρου, αποστειρώνεται στους 120 ° C "C 20 λεπτά (ρΗ 7.3).

Εμπλουτισμένο μέσο. Πολλοί τύποι παθογόνων βακτηρίων δεν αναπτύσσονται καλά σε κοινά χρησιμοποιούμενα θρεπτικά μέσα · ως εκ τούτου, στο κύριο μέσο προστίθενται αίμα, ορός, υδατάνθρακες κλπ. Τέτοια θρεπτικά μέσα ονομάζονται εμπλουτισμένα.

Ορός ορού και αίμα άγαρ: 5. Προστίθεται 10% αποστειρωμένο αποφλοιωμένο αίμα εμβολίου (κουνελιού) ή ορού αίματος (άλογο, βοοειδή, κουνέλι) σε λειωμένο και ψύχεται σε 45 ° C αποστειρωμένο θρεπτικό άγαρ. Για να ληφθεί αποφλοιωμένο αίμα από ένα κριάρι, το αίμα λαμβάνεται ασηπτικά από τη σφαγιτιδική φλέβα με αποστειρωμένη βελόνα σε αποστειρωμένο φιαλίδιο (ή κώνο) με γυάλινες (πορσελάνινες) χάνδρες ή σφαίρες και ανακινείται με περιστροφικές κινήσεις για 15.20 λεπτά για την πρόληψη της πήξης του αίματος. Το Fibrin παραμένει στις χάντρες.

Τα συστατικά αναμιγνύονται, χύνεται σε τρυβλία Petri, σωλήνες και αφήνεται για να στερεοποιηθεί το θρεπτικό μέσο.

Ο ορός και οι ζωμοί αίματος παρασκευάζονται με παρόμοιο τρόπο..

Τα διαλύματα υδατανθράκων (γλυκόζη, κλπ.) Αποστειρώνονται με ροή ατμού ή με διήθηση και προστίθενται σε ποσότητα 0,5. 1% στο θρεπτικό μέσο.

Ειδικά περιβάλλοντα. Αυτό είναι το όνομα του περιβάλλοντος, που αναπτύχθηκε λαμβάνοντας υπόψη τις ειδικές ανάγκες ανάπτυξης ενός αριθμού βακτηρίων. Για παράδειγμα, μέσο κρόκου McCoy για τον αιτιολογικό παράγοντα της τυλεραμίας, μέσο Tersky για καλλιέργεια λεπτόσπιρας κλπ..

McCoy Τετάρτη: καθαρά αυγά κοτόπουλου αντιμετωπίζονται με αλκοόλ, γρήγορα πέρασε από τη φλόγα του καυστήρα. Ανοιχτά αποστειρωμένα, οι κρόκοι διαχωρίζονται από τις πρωτεΐνες. Σε 60 μέρη των κρόκων προστίθενται 40 μέρη αλατούχου διαλύματος (ρΗ 7,0, 7,2). Τα συστατικά αναμιγνύονται, χύνεται σε σωλήνες των 4,5 ml και τοποθετούνται σε κεκλιμένη θέση στη συσκευή για την πήξη του ορού. Αποστειρώθηκε την πρώτη ημέρα στους 75 ° C για 1 ώρα, τη δεύτερη ημέρα στους 85 ° C για 30 λεπτά. Για τον έλεγχο της στειρότητας, το παρασκευασμένο μέσο διατηρείται για 2 ημέρες σε θερμοστάτη στους 37. 38 ° C.

Το περιβάλλον του Tersky αποτελείται από ένα μείγμα φωσφορικών Zerensen και ορρού κουνελιού. Μείγμα Zerensen: διάλυμα Α: όξινο φωσφορικό νάτριο – 11,876 g, απεσταγμένο νερό – 1000 ml. διάλυμα Β: δισόξινο φωσφορικό κάλιο – 9,078 g, αποσταγμένο νερό – 1000 ml. Σε 90 ml διαλύματος Α, προστίθενται 10 ml διαλύματος Β και ρυθμίζεται ο όγκος με απεσταγμένο νερό στα 1000 ml. Το διάλυμα χύνεται σε σωληνάρια των 5 ml, αποστειρώνεται σε 1,5 atm για 20 λεπτά. Στο κάθε σωλήνα προστίθενται έξι έως οκτώ σταγόνες στείρου ορρού κουνελιού αδρανοποιημένου στους 56 ° C.

Επιλεκτικά περιβάλλοντα(ευρύς ηλεκτρός – ο επιλεγμένος). Είναι θρεπτικό
μέσα για την επιλεκτική απομόνωση και συσσώρευση μικροοργανισμών ορισμένου τύπου από υλικά που περιέχουν διάφορους τύπους μικροβίων. Τα επιλεγμένα περιβάλλοντα είναι εξαιρετικά διαφορετικά ως προς τη σύνθεση. Περιλαμβάνουν συστατικά που παρέχουν προνομιακή ανάπτυξη του επιθυμητού μικροοργανισμού και
(ή) καταστολή, σε ένα ή άλλο βαθμό, της αύξησης της ταυτόχρονης
μικροχλωρίδα. Η συνοχή αυτού του τύπου μέσου μπορεί να είναι
πυκνό και ρευστό. Τα υγρά εκλεκτικά περιβάλλοντα ονομάζονται περιβάλλοντα εμπλουτισμού ή συσσώρευσης, χρησιμοποιούνται όταν τοποθετούνται

στόχο να αυξηθεί ο αριθμός του επιθυμητού μικροοργανισμού σε ένα μικτό πληθυσμό.

Το άγαρ γάλακτος και αλατιού προορίζεται για την εκλεκτική καλλιέργεια σταφυλόκοκκων. Για την τήξη MPA με ρΗ 7.2. 7,4, που περιέχει 5,5% χλωριούχο νάτριο, προσθέστε 10% αποστειρωμένο αποβουτυρωμένο γάλα, αναμίξτε και ρίξτε σε πιάτα Petri.

Το μέσο Shustovoi προορίζεται για την απομόνωση της σαλμονέλας. Είναι ένα ΜΡΑ (ρΗ 7,4) με την προσθήκη 10% στον όγκο του μέσου ενός υδατικού διαλύματος θειοθειικού νατρίου 50% και ενός διαλύματος 2% Lugol.

Το μέσο Rappoport προορίζεται για την καλλιέργεια σαλμονέλας. Στο BCH προσθέτουμε 1% γλυκόζη, 10% χολή, 1% δείκτη Andrade. Αποστειρωμένο με ατμό.

Το μέσον Müller προορίζεται για την καλλιέργεια της σαλμονέλας. 90 ml MPB χύνεται σε μία φιάλη με 4,5 g αποστειρωμένης κιμωλίας, αποστειρωμένη σε αυτόκλειστο στους 120 ° C "Από 30 λεπτά Στη συνέχεια προστίθενται στείρα 2 ml διαλύματος Lugol και 10 ml διαλύματος θειοθειικού νατρίου (θειοθειικό νάτριο – 50 g, αποσταγμένο νερό – 100 ml), αποστειρωμένο σε συσκευή Koch για 30 λεπτά.

Το μέσο Kaufman είναι μέσο εμπλουτισμού για τη σαλμονέλα. Σε 100 ml μέσου του Müller, προσθέστε 1 ml υδατικού διαλύματος λαμπρό πράσινο αραιωμένο 1: 1000 και 5 ml αποστειρωμένης χολής των βοοειδών. Το μίγμα αποστειρώνεται με ατμό επί 30 λεπτά.

Το άγαρ καζεΐνης-άνθρακα (AMC) με πενικιλίνη χρησιμοποιείται για την καλλιέργεια βορτετελλών. Στο 1000 ml αποσταγμένου νερού προστίθενται υδρολύματα καζεΐνης – 20 ml, χλωριούχο νάτριο – 5 g, χλωριούχο κάλιο – 0,2 g, χλωριούχο ασβέστιο – 0,002 g, ανθρακικό νάτριο – 0,4 g, χλωριούχο μαγνήσιο – 0,025 g, όξινο φωσφορικό κάλιο – 0. , 24 g, διαλυτό άμυλο – 1 g, κυστίνη – 0,01 g, άγαρ – 20 g. Τα συστατικά διαλύονται, το ρΗ ρυθμίζεται στο 7,2 και αποστειρώνεται σε 0,5 atm για 30 λεπτά. Πριν από τη χρήση, προστίθενται 3% εκχύλισμα ζύμης και 0,2% ξηρός ενεργοποιημένος άνθρακας και 0,5 U / ml πενικιλλίνη σε τετηγμένο άγαρ (50 ° C). Τα συστατικά αναμιγνύονται και χύνεται σε τρυβλία Petri.

Διαφορικά διαγνωστικά περιβάλλοντα. Σχεδιασμένο για την ανίχνευση ενζύμων σε μικροοργανισμούς. Η συνοχή μπορεί να είναι υγρή, ημι-ρευστή, πυκνή. Η σύνθεση αυτών των μέσων περιλαμβάνει το κύριο θρεπτικό μέσο που εξασφαλίζει την ανάπτυξη του μελετώμενου μικροοργανισμού, ένα υπόστρωμα για την ανίχνευση του ενζύμου και έναν δείκτη, με την αλλαγή χρώματος του οποίου κρίνουν την μεταβολή στο ρΗ του μέσου ως αποτέλεσμα της διάσπασης του υποστρώματος.

Τα θρεπτικά μέσα αυτού του τύπου περιλαμβάνουν το περιβάλλον των Giss, Endo, Ploskirev, Levin, κλπ..

Τα μέσα Giess χρησιμοποιούνται για να μελετήσουν τις ενζυματικές ιδιότητες των απομονωμένων καλλιεργειών μικροοργανισμών. Σε 100 ml αποσταγμένου νερού προστίθεται 1% πεπτόνη, 0,5 g χλωριούχου νατρίου. Τα συστατικά διαλύονται, διηθούνται μέσω χάρτινου φίλτρου, το ρΗ ρυθμίζεται στο 7,0. 7.4, προσθέστε ένα από τα υδατανθρακικά υποστρώματα (λακτόζη, γλυκόζη κλπ.), Άγαρ-άγαρ (0.3, 0.4%) και στη συνέχεια 1 ml δείκτη Andrade ή 0.1 ml 1.6% βρωμοθιμόλης. Το τελικό μέσο χύνεται σε 3 ml στους δοκιμαστικούς σωλήνες, αποστειρώνεται με ατμό για τρεις διαδοχικές ημέρες για 30 λεπτά ή στους 112 ° C για 20 λεπτά.

Το ξηρό μέσο Gissa απελευθερώνεται με τον δείκτη BP – ένα μείγμα γαλάζιου νερού με ροζολικό οξύ (έτοιμο υλικό – ημι-υγρή σύσταση).

Χρησιμοποιούνται πυκνά διαφορικά διαγνωστικά περιβάλλοντα για την πρωταρχική απομόνωση των παθογόνων από το υλικό. Εκτός από το γνωστό υπόστρωμα, συχνά περιλαμβάνουν ουσίες που δίνουν επιλεκτικές ιδιότητες στο θρεπτικό μέσο.

Το Endo Medium περιέχει λακτόζη ως υπόστρωμα και έχει σχεδιαστεί για να διαφοροποιεί τα βακτηρίδια που διαφέρουν στην ικανότητά τους να διασπάσουν τη λακτόζη.

Σε 1000 ml τετηγμένου ΜΡΑ (ρΗ 7,4) σε θερμοκρασία 70 ° C προστίθεται 1 g λακτόζης, που προηγουμένως διαλύθηκε σε μικρή ποσότητα απεσταγμένου βρασμένου νερού. Σε ξεχωριστούς σωλήνες, παρασκευάστε: 2. 3 ml αλκοολικού διαλύματος βασικής φουκσινης. 10 ml ενός 10% υδατικού διαλύματος θειικού νατρίου.

1 ml διαλύματος φουξίνης προστίθεται σε αποστειρωμένο σωλήνα και προστίθεται διάλυμα θειώδους νατρίου μέχρι να αποχρωματιστεί η φουκσίνη. Το παρασκευασθέν μίγμα χύνεται σε τετηγμένο άγαρ, αναμιγνύεται και χύνεται σε τρυβλία Petri. Το τελικό μέσο είναι άχρωμο, με την ανάπτυξη μικροοργανισμών που διασπούν τη λακτόζη σε αυτό, το μέσον οξινίζεται, αποκαθίσταται η αποχρωματισμένη φουξίνη και η αποικία του μικροοργανισμού, για παράδειγμα η Escherichia, γίνεται κόκκινη με μεταλλική απόχρωση. Η Τετάρτη προετοιμάζεται μία ημέρα πριν από τη χρήση της. Η Endo παράγει επίσης ξηρά μέσα. Πριν από τη χρήση, ένα ορισμένο μέρος της σκόνης εισάγεται σε απεσταγμένο νερό, βράζει και χύνεται σε πιάτα Petri.

Το μέσο Levin είναι παρόμοιο με τον προορισμό του με το μέσο Endo, αλλά περιέχει έναν άλλο δείκτη (ηωσίνη με μπλε του μεθυλενίου). Σε 100 ml τετηγμένου ΜΡΑ (ρΗ 7,2, 7,4) προστίθενται 2 ml υδατικού διαλύματος 0,5% κυανού μεθυλενίου, 1,5 ml διαλύματος κίτρινου ηωσίνης 2%, 2 g λακτόζης, 0,2 g φωσφορικού δισόξινου κάλιο. Τα διαλύματα βαφής παρασκευάζονται σε απεσταγμένο νερό, αποστειρώνονται με ροή ατμού για 60 λεπτά. Η λακτόζη και το διϋδροφωσφορικό κάλιο αραιώνονται εκ των προτέρων σε μικρή ποσότητα αποστειρωμένου απεσταγμένου νερού και βράζονται. Οι αποικίες των βακτηρίων που είναι θετικά στη λακτόζη σε αυτό το μέσο είναι χρωματισμένα πορφυρό-μαύρο..

Το άγαρ Ploskirev προορίζεται για την απομόνωση της σαλμονέλας, περιέχει λακτόζη ως υπόστρωμα και συστατικά που αναστέλλουν την ανάπτυξη της ταυτόχρονης μικροχλωρίδας. Το μέσον απελευθερώνεται σε μορφή σκόνης, επιπλέον της βάσης θρεπτικού άγαρ, περιλαμβάνει: χολικά άλατα, κιτρικό νάτριο, θειοθειικό νάτριο, φωσφορικό νάτριο, λαμπρό πράσινο, ανθρακικό νάτριο, ιώδιο, χλωριούχο νάτριο, λακτόζη, ουδέτερο κόκκινο. Ένα μέρος της σκόνης διαλύεται σε νερό, βράζει και χύνεται σε πιάτα Petri. Το έτοιμο μέσο είναι διαφανές ή ροζ χρώμα. Οι αποικίες της σαλμονέλας είναι άχρωμες, χρώματος Escherichia – lingonberry.

Μέθοδοι καλλιέργειας μικροοργανισμών. Μαζί με τις γενικές αρχές, η καλλιέργεια μικροοργανισμών διαφόρων φυσιολογικών ομάδων έχει ορισμένα χαρακτηριστικά. Καλλιέργεια αερόβιων και προαιρετικών αναερόβιων βακτηριδίων. Τα πυκνά, υγρά ή ημι-υγρά θρεπτικά μέσα εμβολιασμένα με καθαρές καλλιέργειες μικροοργανισμών ή με το υλικό δοκιμής τοποθετούνται σε θερμοστάτες (σχήμα 34) που διατηρούν τη βέλτιστη θερμοκρασία για τον δεδομένο μικροοργανισμό. Σε θερμοκρασίες που υπερβαίνουν το ανώτερο φυσιολογικό όριο, τα βακτήρια όχι μόνο επιβραδύνουν την ανάπτυξη, αλλά και πεθαίνουν γρήγορα. Σε θερμοκρασίες κάτω από το βέλτιστο, ο ρυθμός ανάπτυξης του μικροοργανισμού επιβραδύνεται σταδιακά.

Για τα μεσοφιλικά, η βέλτιστη θερμοκρασία είναι στην περιοχή των 30. 37 ° C, για τα ψυχρόφιλα – 10. 15 ° C, για τους θερμοφιλείς – 50. 60 ° С.

Οι μικροοργανισμοί στη διαδικασία καλλιέργειας σε θρεπτικά υλικά, με την προϋπόθεση ότι δεν προστίθενται πρόσθετες ουσίες στα μέσα, σταδιακά επιβραδύνουν και στη συνέχεια σταματούν την ανάπτυξή τους εξαιτίας της εξάντλησης του θρεπτικού υποστρώματος, των μεταβολών στις βέλτιστες τιμές των βιοφυσικών παραμέτρων (pH, Eh κλπ.). Αυτή η καλλιέργεια μικροοργανισμών ονομάζεται περιοδική. Εάν συγχρόνως το υγρό θρεπτικό μέσο δεν αναμειχθεί κατά την επώαση των καλλιεργειών, τότε αυτή η μέθοδος καλλιέργειας ορίζεται ως στάσιμη. Στις διαγνωστικές βακτηριολογικές μελέτες χρησιμοποιείται συνήθως μια τέτοια μέθοδος καλλιέργειας. Στην βιολογική βιομηχανία, στην παραγωγή εμβολίων και άλλων βιολογικών προϊόντων, όταν είναι απαραίτητη η επίτευξη της μέγιστης απόδοσης βακτηριακής μάζας ή εξωτοξινών, χρησιμοποιείται περιοδική καλλιέργεια σε υγρά μέσα με την εντατική ανάμιξή τους..

Για τέτοιες εργασίες, τα αερόβια βακτήρια καλλιεργούνται σε φιάλες, μπουκάλια σε συσκευές παλινδρόμησης με συχνότητα δόνησης 150. 250 λεπτά-1, η οποία διευκολύνει τη μεταφορά οξυγόνου και θρεπτικών συστατικών στα βακτήρια.

Το Σχ. 35. Σχέδιο του ζυμωτήρα για την βαθιά καλλιέργεια αερόβιων μικροοργανισμών.

1 – είσοδος αέρα. 2 – έξοδος αέρα. 3 – τσιπς; 4 – μίξερ; 5 – φυσαλίδα

Η αποτελεσματικότερη καλλιέργεια βακτηριδίων σε υγρά θρεπτικά μέσα με μέγιστη απόδοση βιολογικού προϊόντος επιτυγχάνεται σε ζυμωτήρες. Οι ζυμωτήρες (αντιδραστήρες) είναι μεταλλικά ή γυάλινα δοχεία καλλιέργειας χωρητικότητας από 500 έως 1000 λίτρα (σχήμα 35). Όταν καλλιεργούνται βακτηρίδια σε ζυμωτές, το μέσον αναμιγνύεται με ειδικούς αναμίκτες ενώ παρέχεται η απαιτούμενη ποσότητα αποστειρωμένου αέρα. Οι ζυμωτήρες σχεδιάζονται ως αυτόνομα συστήματα με αυτόματη ρύθμιση θερμοκρασίας και pH. Οι ζυμωτές διεξάγουν επίσης συνεχή (ροή) καλλιέργεια, στην οποία, σε αντίθεση με την καλλιέργεια κατά παρτίδες, τα φρέσκα θρεπτικά συστατικά τροφοδοτούνται αυτόματα στο μέσο με ρυθμό ίσο με την απομάκρυνση ενός παρόμοιου όγκου της αναπτυγμένης βακτηριακής καλλιέργειας. Μια τέτοια συνεχής καλλιέργεια σε ένα καλά ρυθμισμένο σύστημα μπορεί καταρχήν να συνεχιστεί επ ‘αόριστον.

Η καλλιέργεια αναερόβιων βακτηριδίων. Υποχρεωτικά αναερόβια είναι τα βακτήρια στα οποία εμφανίζεται ενεργειακός και δομικός μεταβολισμός χωρίς μοριακό οξυγόνο 02. Σε τέτοιους μικροοργανισμούς, η διαδικασία αναπνοής από τερματικούς δέκτες

τα ηλεκτρόνια είναι μονοξείδιο του άνθρακα (IV), θειικά ιόντα, φουμαρικό άλας, κλπ. Επιπλέον, το μοριακό οξυγόνο δρα καταστρεπτικά σε πολλά αναερόβια. Για παράδειγμα, τα βαριά αναερόβια πεθαίνουν σε χαμηλές συγκεντρώσεις οξυγόνου (βακτηριοειδή, φουσοβακτηρίδια), μέτρια αναερόβια είναι λιγότερο ευαίσθητα (C. perfringens), αναερόβια που προκαλούν ανεπάρκεια στο αερόβιο μπορούν να αναπτυχθούν σε κανονική ατμόσφαιρα (βακτήρια γαλακτικού οξέος). Τα περισσότερα παθογόνα αναερόβια ταξινομούνται ως σοβαρά ή μέτρια αναερόβια. Για την καλλιέργειά τους χρησιμοποιούνται ειδικά θρεπτικά μέσα και μείγματα αερίων. Το τελευταίο για την πλήρωση αναερόστατων.

Μια απαραίτητη προϋπόθεση για την ανάπτυξη υποχρεωτικών αναερόβιων δεν είναι τόσο η απουσία μοριακού οξυγόνου ως χαμηλού ΟΚνΡ θρεπτικών μέσων. Οι δραματικά μειωτικές συνθήκες επιτυγχάνονται με την προσθήκη αναγωγικών (μειώνοντας) ουσιών στο μέσο και ταυτόχρονα με την απομάκρυνση του μοριακού οξυγόνου από αυτά. Ως αναγωγικές ουσίες στο θρεπτικό μέσο προστίθενται οι χημικές ενώσεις που παρουσιάζονται στον πίνακα 1.

1. Μείωση των ουσιών για την καλλιέργεια αναερόβιων

Αναγωγικός παράγοντας Ε0, mV Η περιεκτικότητα του μέσου αναγωγής στο μέσο,%
Θειογλυκολικό νάτριο 3 45678910111213141516 Επόμενο

Ημερομηνία προσθήκης: 2016-07-22; Προβολές: 2332;

Αφήστε μια απάντηση